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1.PrepareNADHstocksolution:

Add200µLofPBSbufferintothevialofNADHstandard(ComponentC)tohave1mM(1nmol/µL)NADHstocksolution.

Note:TheunusedNADHstocksolutionshouldbedividedintosingleusealiquotsandstoredat-20^oC.

2.PrepareNAD/NADHreactionmixture:

2.1   Add8mLofNADHProbebuffer(ComponentB-II)tothebottleofNAD/NADHRecyclingEnzymeMixture(ComponentA),andmixwell.

2.2   Add2mLNADHProbe(ComponentB-I)intoabovebottle(fromStep2.1)andmixwell. 

Note:ThisNAD/NADHreactionmixtureisenoughfor125~200assays.TheunusedNAD/NADHreactionmixtureshouldbedividedintosingleusealiquotsandstoredat-20^oC.

3.PrepareseriallydilutedNADHstandards(0to10μM):

3.1   Add10µLof1mMNADHstocksolution(fromStep1)into990µLPBSbuffer(pH7.4)togenerate10µM(10pmols/µL)NADHstandardsolution.

Note:DilutedNADHstandardsolutionisunstable,andshouldbeusedwithin4hours.

3.2   Take200µLof10µMNADHstandardsolution(fromStep3.1)toperform1:2serialdilutionstoget5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078and0µMseriallydilutedNADHstandards.

4. RunTotalNAD/NADHAssay(total400assays/kit):

4.1   AddserialdilutionsofNADHstandardandNAD/NADHcontainingtestsamplesintoawhite/clearbottom96-wellmicroplateasdescribedinTables1and2.

Note:PreparecellsortissuesamplesasdesiredNAD/NADHLysisBuffer(ComponentG)canbeusedforlysingthecells(Seeappendixfordetails).

Table1.LayoutofNADHstandardsandtestsamplesinawhite/clearbottom96-wellmicroplate

Note:NS=NADHStandards,BL=BlankControl,TS=TestSamples.

Table2.Reagentcompositionforeachwell

*Note:AddtheseriallydilutedNADHstandardsfrom0.078μMto5μMintowellsfromNS1toNS7induplicate.HighconcentrationofNADH(e.g.,>100μM,finalconcentration)willcausesaturatedsignalandmakethecalibrationcurvenon-linear.

4.2   Add50μLofNAD/NADHreactionmixture(fromStep2.2)intoeachwellofNADHstandard,blankcontrol,andtestsamples(fromStep4.1)tomakethetotalNAD/NADHassayvolumeof100µL/well.

4.3   Incubatethereactionatroomtemperaturefor15minutesto2hours,protectedfromlight.

4.4   Monitortheabsorbanceincreasewithanabsorbanceplatereaderat460nm.

5. RunNAD/NADHRatioAssay(total250assays/kit):

5.1   AddseriallydilutedNADHstandardsand/orNAD/NADHcontainingtestsamplesintoawhite/clear96-wellmicroplateasdescribedinTables3and4.

Note:Preparecellsortissuesamplesasdesired.LysisBuffer(ComponentG)canbeusedforlysingthecellsforconvenience(Seeappendixfordetails).

Table3.LayoutofNADHstandardsandtestsamplesinawhite/clear96-wellmicroplate

Note:NS=NAD/NADHStandards;BL=BlankControl;TS=TestSamples;TS(NAD)=TestSamplestreatedwithNADExtractionSolution(ComponentD)for10to15minutes,thenneutralizedbyNeutralizationSolution(ComponentE).

Table4.Reagentcompositionsforeachwell

NADHStandard	BlankControl	TestSample(NAD/NADH)	TestSample(NADExtract)
SerialDilutions*:25 品牌介绍 美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收(颜色)、荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学、免疫学、细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断研发新产品，快速地丰富各个领域的产品。 1）提供反应探针和发光探针，生物素和端粒酶能够应用于标记药物小分子和生物聚合物，如蛋白、核酸以及其他碳水化合物； 2）研究并生产荧光和发光探针用于检测蛋白，核酸和活细胞； 3）不断推出新型的荧光和发光探针用于检测多种酶，特别是检测水解酶和氧化还原酶类； 4）致力于开发用于信号转导研究的试剂； 5）提供生理和神经探针，特别是钙离子指示剂和膜电位探针。 公司介绍 美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收(颜色)、荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学、免疫学、细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断 品牌分类 淋巴细胞信号传导 GPCR抗体 羰基活性生物素 细胞代谢 胺反应生物素 链霉亲和素结合物 生物素化抗IgGs 乙酰基特异性抗体 细胞骨架抗体 受体结合试验 香豆素类 经典标记染料 神经酶 cAMP-GPCR分析 糖蛋白类 荧光成像 Boc氨基酸 巯基活性生物素 淬火CPG 蛋白激酶类 解理特异性抗体 胺到羧基 细胞功能分析 pH和离子指示剂 iFluor快速测试 诊断分子 氯离子通道 潮汐染料 蛋白激酶Ab 生物素结合物 金属离子 葡萄糖转运蛋白 脂肪酸转运体 MDR研究 水解酶 磷酸特异性抗体 膜电位 经典淬火剂 胺和硫醇改性剂 一般蛋白质类 胆汁酸转运蛋白 粘附力Ab trFluor染料和试剂盒 DNA检测 β淀粉样蛋白分析 转移酵素 潮汐荧光染料和试剂盒 Fmoc氨基酸 细胞周期Ab 标记单元格 染料CPGs 细胞凋亡 菁 信号中间体Ab 荧光碳水化合物标签 酶标抗IgGs 癌症研究所 流式细胞术 肽酶和蛋白酶 报告基因酶 细胞凋亡与细胞毒性 磷酸二酯酶 活性氧种类 Cytocrhome P450酶 重要污点 染料标记试剂 染色积木 标记抗体 神经抗体 荧光抗IgGs 离子通道Ab 辣根过氧化物酶（HRP） 磷酸酶 钙GPCR测定 猝灭磷酰胺 细胞毒性 氧化还原酶 RNA检测 转录抗体 mFluor染料和试剂盒 翻译Ab 染料磷酰胺岩 iFluor染料和试剂盒 组蛋白脱乙酰酶（HDAC） 肽标记试剂 离子通道 植物蛋白 阴离子 显示分类 联络我们 服务热线：4000-520-616 （限工作日9:00-18:00） QQ ：1570468124 手机：18915418616 官网：http://www.aatbio.com/ 快速导航： 公司介绍 产品中心 新闻动态 在线咨询 联系我们 公司介绍 产品中心 新闻动态 在线咨询 联系我们 总部地址： 江苏省苏州市工业园区星湖街218号 苏州生物医药产业园一期（生物纳米园）A4-216(邮编：215125) 工作时间：周一至周五9:00~18:00 技术支持： Email：info@ebiomall.com 短信：18915418616 服务热线： 4000-520-616（全国） ☏  0512-67156496（苏州） 版权信息： ©  2015-2022 苏州蚂蚁淘生物科技有限公司 版权所有 中国 网站备案： 苏ICP备17049038号-1 苏公网安备 32059002001627号 友情链接： 联系QQ:764052152 absolute采购 accelagen正品 targeting清关 agrenvec官网 alomone代购 arthus报价 axolbio badrilla biodtech biognosys abionline产品 GeneTex Inc代理 HTI公司 TOKU-E代理商 superiormarker华东代理 hpc-standards厂家 tedpella代理 蚂蚁淘 北京百智生物科技有限公司 免责声明： 本站有部分内容来自互联网，如无意中侵犯了某个媒体 、公司 、企业或个人等的知识产权，请来电或致函告之， 本网站将在规定时间内给予删除等相关处理。 扫描二维码关注官方微信 获取最新促销及产品信息