钙指标 | AAT生物探索 AAT Bioquest产品

来自 : 发布时间：2024-12-25

钙指示剂显示相关文章Fluo-3Fluo-4Fluo-8比率钙指示剂细胞内离子钙指示剂G-蛋白偶联受体 (GPCR)相关细胞凋亡和坏死细胞周期测定 G-蛋白偶联受体 (GPCR)Screen Quest™ 产品基于细胞的钙通量测定广泛用于高通量分析筛选 (HTS) 以确定通过 G 蛋白偶联受体 (GPCR) 的激动剂刺激和拮抗剂抑制的信号传导，GPCR 是一个大的完整膜蛋白家族，也是药物发现中的一个重要目标类别。准确测量细胞内钙浓度和动员可以更全面地了解钙调节信号通路、细胞功能和病理过程。 AAT Bioquest 开发了最大的钙指示剂系列，包括 Fluo-8®、Cal-520® 和 Calbryte™ 钙指示剂，以及钙通量测定，以通过强荧光信号和在从紫外线到红外线的各种波长选项。

目录量化细胞溶质钙1.1 用于活细胞钙成像的荧光 AM 酯衍生物单波长钙指示剂2.1 单波长钙指示剂的主要特征比例钙指示剂3。 1 比例钙指示剂的主要特征 Calbryte™ 钙指示剂4.1 Calbryte™ 钙指示剂的主要特征Cal-520® 钙指示剂5.1 Cal-520® 钙指示剂的主要特征Fluo 8® 钙指示剂6.1 Fluo 8® 钙指示剂的主要特征Fluo- 3 和 Fluo-4 钙指示剂用于筛选 GPCR 和钙通道靶标的钙测定8.1 Screen Quest™ 钙测定的主要特征用于药物发现和高通量筛选的 GPCR 细胞系订购信息

量化细胞溶质钙Cal-520® 葡聚糖钙是一种影响许多信号转导途径的无处不在的信使，包括钙诱导的蛋白质确认变化、细胞溶质和细胞器钙水平的调节、钙介导的信号转导的高度局部化性质及其在兴奋性、胞吐作用、运动性、细胞凋亡中的特定作用，和转录。这些途径调节许多关键的细胞过程，包括神经传递、细胞增殖和肌肉收缩。在细胞外液的正常条件下，钙的静息细胞质浓度相对较低，等于或低于 100 nM。钙信号通过从细胞内储存的钙离子释放，或通过质膜离子通道流入细胞外钙而被激活。刺激细胞可以公司使细胞质钙浓度升高至 500 至 1000 nM。用于活细胞钙成像的荧光 AM 酯衍生物在结合钙时显示光谱响应的荧光指示剂使研究人员能够通过使用荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离钙浓度的变化。为了便于检测细胞内钙动员并促进被动扩散，乙酰氧基甲基酯（AM 酯）官能团连接到钙指示剂的核心结构上。这增加了指示剂的疏水性，使其能够轻松穿透完整的质膜，并通过最大限度地减少非特异性背景荧光来提高指示剂的灵敏度，因为 AM 酯共轭指示剂基本上是非荧光和无活性的。一旦探针进入活细胞并且只有在细胞内酯酶去除 AM 酯功能后，活性才会启动唯一的团体。一旦被激活，探针就会通过螯合作用检测钙，并通过产生与钙浓度相关的荧光信号做出响应。 Fluo-8®、AM（目录号 21080）、Cal-520®、AM（目录号 21131）和 Calbryte™ 520、AM（目录号 20653）等指示剂已广泛用于钙成像、钙流用于药物发现的分析和基于细胞的高通量筛选 (HTS) 分析。钙指示剂适用于流式细胞术、荧光显微镜和荧光微孔板平台。除了提供荧光和发光钙指示剂外，我们还提供多种非荧光钙信号分子和螯合剂，用于测量和操纵细胞内和细胞外钙。

单波长钙指示剂单波长钙指示剂广泛用于监测钙动员，成像钙信号的空间动力学，以及基于 HTS 细胞的激动剂药理学筛选通过 GPCR 刺激和拮抗剂抑制信号。这些指示剂在饱和钙水平下表现出显着的钙依赖性荧光强度变化，而不会改变其吸光度或发射波长。我们开发了多种新型钙指示剂，包括 Fluo-8® 系列、Cal-520® 系列和 Calbryte™ 系列，旨在通过最亮的荧光信号和一系列波长和亲和力选项来追踪钙动员满足很多应用。 在 CHO-K1 细胞中测量的 ATP 反应。添加 100 µL 10 µg/ml Calbryte™ 520 AM（目录号 20653），含丙磺舒的 HH 缓冲液或 10 µg/ml Fluo-4，AM（目录号 20550），含丙磺舒的 HH 缓冲液，孵育 45 分钟在 37°C。染料升然后去除负载溶液并替换为 200 µL HH 缓冲液/孔。添加 ATP（50 µL/孔）以达到 10 µM 的最终指示浓度，然后使用显微镜 FITC 通道 (Keyence) 成像。 ...用于通过显微注射、贴片移液器或胞饮细胞加载进行加载紫外线 (UV)、紫罗兰色和可见光可激发形式低、中和高亲和力形式提供了满足许多应用的灵敏度范围表 1. 用于细胞内钙检测染料的绿色荧光钙指示剂▲▼Ex/Em (nm)▲▼滤光片组▲▼Kd¹▲▼Φ²▲▼FCa/FFree³▲▼相对亮度▲▼信号/噪声▲▼单位尺寸▲▼目录号▲▼Calbryte™ 520, AM492/514FITC1 .2 µM0.75∼300 fold************10 x 50 µg20651Cal-520®, AM492/514FITC320 nM0.75∼100 倍******10 x 50 µg21130Fluo-8®, AM494/515FITC389 nM0.16∼200 fold******10 x 50 µg21082Fluo-4, AM492/527FITC345 nM0.16∼100 fold****10 x 50 µg20551Fluo-3, AM506/515FITC390 nM0.15∼100 fold**20 x 50 µg21013Cal Green ™ 1, AM [相当于 Calcium Green-1, AM]498/517FITC190 nM0.75∼14 倍******10 x 50 µg20501Cal Green™ 1, 六钾盐498/517FITC190 nM0.75∼14 倍*** ***10 x 50 µg20500Kd = 钙解离常数。Φ = 存在 5 mM 柠檬酸钙时的荧光量子产率。FCa/FFree = 钙结合指示剂相对于其游离钙指示剂形式的荧光强度增加。表 2. 长用于细胞内钙检测的波长 Rhod 钙指示剂染料▲▼Ex/Em (nm)▲▼滤光片组▲▼Kd¹▲▼单位尺寸▲▼货号▲▼Rhod-2, AM552/576TRITC570 nM20 x 50 µg21064Rhod-4, AM521/ 549TRITC451 nM10 x 50 µg21122Rhod-5N，AM557/579TRITC300 µM1 mg21070Rhod-FF，AM552/576TRITC19 µM10 x 50 µg21078Kd = 离解钙... 0.png&w=256&q=100 1x, /_next/image?url=https%3A%2F%2Fimages.aatbio.com%2Funiversal%2Fcatalog%2FCalcium%2FFura8vsFura2.0.png&w=640&q=100 2x\" src=\"/_next /image?url=https%3A%2F%2Fimages.aatbio.com%2Funiversal%2Fcatalog%2FCalcium%2FFura8vsFura2.0.png&w=640&q=100\" width=\"250\" height=\"181.02824040550325\" decoding=\"async\" 数据- nimg=\"1\" loading=\"lazy\" data:image /svg+xml;charset=utf-8,%3Csvg xmlns=\'http%3A//www.w3.org/2000/svg\' viewBox=\'0 0 250 181.02824040550325\'%3E%3Cfilter id=\'b\' color- interpolation-filters=\'sRGB\'%3E%3CfeGaussianBlur stdDeviation=\'20\'/%3E%3C/filter%3E%3Cimage preserveAspectRatio=\'none\' filter=\'url(%23b)\' x=\'0\' y=\'0\' height=\'100%25\' width=\'100%25\' href=\'data:image/gif;base64,R0lGODlhAQABAPAAAO/v7/// /yH5BAAAAAAALAAAAAABAAEAAAICRAEAOw==\'/%3E%3C/svg%3E\")\"/>用 Fura-2 AM（货号 21023）和 Fura-8™ AM（货号 21056）测量 CHO-K1 细胞中的 ATP 剂量反应). CHO-K1 细胞以 40,000 个细胞/100 µL/孔的密度接种在黑壁/透明底部 96 孔板中过夜，然后与 Fura-2 AM 或 Fura-8 AM 钙测定染料加载溶液一起孵育 1 小时。 ATP 剂量由 Flexstation 添加。与单波长指示剂相比，比例（或双波长）指示剂具有独特的光谱特性，这些特性会响应结合钙而触发。当与钙结合时，比例指示剂的最佳吸光度或发射波长强度会发生变化。例如，双激发钙指示剂 Fura-2、AM 和 Fura-8™、AM 表现出两个激发峰结合或不含钙时的速度。当分别在钙结合和无钙峰值激发波长下激发时，钙浓度的增加会引发双激发指示剂的荧光发射强度的增加和减少。比率钙指示剂的主要特征比率测定可准确测量细胞内钙浓度最小化染料加载不均匀、染料泄漏、光漂白和不同细胞厚度（在混合群体中常见）的影响提供更可靠和可重复的结果指示剂可用于双激发、双发射或双激发和双发射形式可用作膜渗透性 AM 酯（与成像、流式细胞术和微孔板测定兼容，例如 HTS）可用作膜不可渗透盐衍生物，用于通过显微注射、贴片移液器或胞饮加载进行加载了解更多表3. 双激发比例钙指示剂用于活细胞钙成像。染料▲▼Ex/Em（零钙）▲▼Ex/Em（高钙）▲▼过滤器套装▲▼Kd¹▲▼单位尺寸▲▼目录号▲▼Fura-2，AM *UltraPure等级* *CAS 108964-32-5*340/510380/510Fura 2145 nM1 mg21021Fura-2, AM *超纯级* *CAS 108964-32-5*340/510380/510Fura 2145 nM20x50 µg21023Fura-2, AM *CAS 108964- 32-5*340/510380/510Fura 2145 nM1 mg21020Fura-2, AM *CAS 108964-32-5*340/510380/510Fura 2145 nM50 mg21022Fura-2, 五钾盐 *CAS 113694-64-7*340/51 0380/510弗拉2145 nM1 mg21025Fura-2，五钠盐340/510380/510Fura 2145 nM1 mg21026Fura-FF，AM *CAS 348079-12-9*340/510380/510Fura 25.5 µM10x50 µg21027Fura-FF，五钾盐*CAS 192140-58-2*340/ 510380/510Fura 25.5 µM10x50 µg21028Fura-FF，五钾盐 *CAS 192140-58-2*340/510380/510Fura 25.5 µM1 mg21029Fura-8™，AM355/525415/525Fura 2260 nM10x 50 µg21056Fura-8™, AM355/525415/525Fura 2260 nM1 mg21055Fura-8™，五钾盐355/525415/525Fura 2260 nM1 mg21057Fura-8™，五钠盐355/525415/525Fura 2260 nM1 mg21058Fura-8FF™，AM355/525415/525Fura 26 µM10x50 µg20620Fura-8FF™，五钾盐355/525415/525Fura 26 µM10x50 µg20621Fura-10™，AM355/525415/525Fura 2N/D5x5 0 µg21114Fura-10™, AM355/525415/525Fura 2N/ D1 mg21115Fura-10™，钾盐355/525415/525Fura 2N/D5x50 µg21110Fura-10™，钾盐355/525415/525Fura 2N/D1 mg21111整台染料Ex/Em（零钙）Ex/Em（高钙）过滤器套装Kd¹单位尺寸货号I项目每页：510All1 - 10 of 19⟨⟩Kd = 钙解离常数。表 4. 用于活细胞钙成像的双发射比例钙指示剂。染料▲▼Ex/Em（零钙）▲▼Ex/Em（高钙） ▲▼过滤器套装▲▼Kd¹▲▼单位尺寸▲▼目录号▲▼Indo-1, AM *CAS 112926-02-0*355/475355/400Indo-1230 nM1 mg21030Indo-1, AM *CAS 112926-02- 0 *355/475355/400Indo-1230 NM50 MG2103333333333333333333333333333333355/4755/475355/475355/47555/400Indo-1230 NM1 MG21032INDO-1，AM *Ultrapure级0*355/475355/400Indo-1230 nM20x50 µg21036Indo-1，五钾盐 *CAS 132319-21-9*355/475355/400Indo-1230 nM1 mg21040Indo-1，五钠盐355/475355/400Indo-1230 nM1 mg21044Cal Red™ R525/650 AM490/660490/525FITC230 nM10x50 µg20591Cal Red™ R525/650 AM490/ 660490/525FITC230 nM1 mg20590Cal Red™ R525/650 钾盐490/ 660490/525FITC230 nM5x50 µg20588Kd = 钙解离常数。表 5. 用于活细胞钙成像的双激发和双发射比例钙指示剂。染料▲▼Ex/Em（零钙）▲▼Ex/Em（高钙）▲▼截止▲▼Kd¹▲▼单位尺寸▲▼货号▲▼Fura Red, AM *CAS 149732-62-7*435/630470/650610, 630400 nM10x50 µg21048Fura Red, AM *CAS 149732-62-7*435/630470 /650610, 630400 nM1 mg21046Fura Red, potassium salt435/630470/650610, 630400 nM10x50 µg21047Fura Red, potassium salt435/630470/650610, 630400 nM1 mg21045Kd = 钙离解常数。 Calbryte™ 钙指示剂Calbryte™ 系列是开发用于监测细胞内钙动员的最明亮和最强大的钙指示剂家族。它包括三种新型钙指标、Calbryte™ 520、Calbryte™ 590 和 Calbryte™ 630，它们的主要区别在于吸光度和发射波长。 Calbryte™ 探针以明显更高的信号背景特征发射荧光信号，并大大增强了细胞保留。 Calbryte™ 系列已针对荧光显微镜、荧光酶标仪和流式细胞仪的使用进行了优化。它们也可用于高通量筛选应用。 在 CHO-K1 细胞中测量的无丙磺舒 ATP 诱导的钙反应。添加 100 µL 10 µg/mL Calbryte-520 AM 在 HH 缓冲液中或 10 µg/mL Fluo-4 在 HH 缓冲液中，并在 37°C 下孵育 45 分钟。然后去除染料加载溶液并替换为 200 µL HH 缓冲液/孔. FlexStation 3 添加卡巴胆碱（50 µL/孔）以达到最终指示浓度。 Calbryte™ 钙指示剂的主要特点经过验证的性能、卓越的信噪比和细胞内保留特性 Calbryte™ 探针在相同条件下明显比任何其他钙指示剂更亮大大提高了信号背景比增强细胞内保留，消除了丙磺舒的使用快速和在 45 至 60 分钟内方便地加载细胞 均匀细胞溶质定位 红移 Calbryte™ 590 和 Calbryte™ 630 可与 GFP 或其他绿色荧光染料一起用于多重检测作为 HTS）可用作膜不可渗透盐衍生物，用于显微注射、贴片移液器或胞饮加载可用作与载体结合的活性染料表 6. 用于活细胞钙成像的 Calbryte™ 钙指示剂.Dye▲▼Ex (nm)▲▼Em (nm)▲▼Filter Set▲▼Kd¹▲▼FCa/FFree²▲▼Unit Size▲▼Cat No.▲▼Calbryte™ 520, AM493515FITC1.2 µM∼300 fold2x50 µg20650Calbryte™ 520, AM493515FITC1.2 µM∼300 fold10x50 µg20651Calbryte™ 520, AM493515FITC1.2 µM∼300 fold1 mg20653Calbryte™ 520, 钾盐493515FITC1.2 µM∼300 fold2x50 µg20656Calbryte™ 520, 钾盐493515FITC1.2 µM∼300倍10x50 µg20658Calbryte™ 520L, AM493515FITC100 µM ∼300 倍 10x50 µg20640Calbryte™ 520L，钾盐493515FITC100 µM∼300 倍10x50 µg20642Calbryte™-520XL 叠氮化物493515FITC300 µM∼300 倍1 mg20643Calbryte™-520XL 叠氮化物49351 5FITC300 µM∼300 fold10x50 µg20645Calbryte™ 590, AM581593Cy3/TRITC1.4 µM∼300 fold2x50 µg20700Calbryte™ 590, AM581593Cy3/ TRITC1.4 µM∼300 fold10x50 µg20701Calbryte™ 590, AM581593Cy3/TRITC1.4 µM∼300 fold1 mg20702Calbryte™ 590, 钾盐581593Cy3/TRITC1.4 µM∼300 fold5x50 µg20706Calbryte™ 590 , 钾盐581593Cy3/TRITC1.4 µM∼300倍1 mg20707Calbryte™ 630, AM607624Texas Red1.2 µM∼300 fold2x50 µg20720Calbryte™ 630, AM607624Texas Red1.2 µM∼300 fold10x50 µg20721Calbryte™ 630, AM607624Texas Red1.2 µM∼300 fold1 mg20722Calbryte™ 630, 钾盐607624Texas Red1.2 µM∼300 fold5x50 µg20727整表DyeEx (nm)Em (nm) )Filter SetKd¹FCa/FFree²Unit SizeCat No.Items每页：510All1 - 10 of 18⟨⟩Kd = 钙解离常数。Φ = 存在 5 mM 柠檬酸钙时的荧光量子产率。FCa/FFree = 钙结合指示剂相对于其无钙指示剂形式的荧光强度增加。

Cal-520® 钙指示剂ATP刺激的内源性P2Y钙反应CHO-K1 细胞中的受体分别与不含丙磺舒的 Cal-520® AM（红色曲线）或 Fluo-4 AM（蓝色曲线）孵育。CHO-K1 细胞以每孔 50,000 个细胞/100 µL 的密度接种在 Costar black 中过夜壁/透明底 96 孔板。100 µL 5 µM Flu将含有或不含丙磺舒的 HHBS 中的 o-4 AM 或 Cal 520® AM 添加到细胞中，并将细胞在 37°C 下孵育 1 小时。使用 FlexSation 添加 ATP（50 µL/孔）以达到最终指示浓度。 Cal-520® 钙指示剂系列是最全面的荧光钙敏感染料产品组合。它包括六种独特的指示剂，Cal-500™、Cal-520®、Cal-590™、Cal-630™、Cal-670™ 和 Cal-770™，它们的主要区别在于吸收和发射波长。每个指示剂在静息钙水平下发出最小荧光，并在饱和钙浓度下增加其荧光强度 > 100 倍。 Cal-520® 系列指示剂可用作膜渗透性 AM 酯、膜不可渗透性盐衍生物和葡聚糖偶联物。 Cal-520® 钙指示剂的主要特点比 Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2 和 Rhod-5 更高的信号背景比增强细胞内保留方便、高效的细胞loadingHomogenous cytosolic localizationRed-shifted Cal-590™, Cal-630™, Cal-670™ and Cal-770™ can be used with GFP or other green-fluorescent dye for multiplexingCal-770™ may be used for in vivo studiesAvailable as membrane-渗透性 AM 酯（与成像、流式细胞术和微孔板检测兼容，例如 HTS）可作为膜不可渗透盐衍生物通过显微注射、贴片移液器或胞饮加载进行加载可作为活性染料与载体结合 表 7.Cal-用于活细胞钙成像和多色钙通量测定的 520® 钙指示剂。染料▲▼Ex (nm)▲▼Em (nm)▲▼滤光片组▲▼Kd¹▲▼Φ²▲▼FCa/FFree³▲▼Unit Size▲▼Cat No.▲▼Cal-500™, AM388482DAPI303 nM0.48∼100 fold10x50 µg20412Cal-500™, potassium salt388482DAPI303 nM0.48∼100 fold10x50 µg20410Cal-520®, AM493515FITC320 nM0.75∼100 fold 10x50 µg21130Cal-520®，钾盐 493515FITC320 nM0。 75∼100倍10x50µg21140Cal-590™ AM574588Cy3/TRITC561 nM0.62∼100倍5x50µg20510Cal-590™钾盐574588Cy3/TRITC561 nM0.62∼100 fold5x50 µg20518Cal-630™ AM609626Texas Red792 nM0.37∼100 fold5x50 µg20530Cal-630™, 钾盐609626Texas Red792 nM0.37∼100 fold5x50 µg20538Cal-670 ™, 钾盐667680Cy5853 nMN/D∼100倍10x50 µg20455Cal-770™ , 钾盐758783Cy7850 nMN/D∼100 fold10x50 µg20460Cal-520®, AM493515FITC320 nM0.75∼100 fold1 mg21131Cal-520FF™, AM493515FITC9.8 µM0.75∼100 fold10x50 µg21143Cal -520FF™, AM493515FITC9.8 µM0.75∼100倍1 mg21142Cal -520N™, AM493515FITC90 µM0.75∼100 fold10x50 µg21146Cal-520®, 钾盐493515FITC320 nM0.75∼100 fold1 mg21141Cal-520®, 钠盐493515FITC320 nM0.75∼100 fold10x50 µg211 35Cal-520®, 钠盐493515FITC320 nM0.75∼100倍1 mg21136Cal-520FF™，钾盐493515FITC9.8 µM0.75∼100倍10x50µg21144Cal-520N™，钾盐493515FITC90µM0.75∼100倍10x50µg21147Cal-520®-葡聚糖偶联物*MW 3,000*49 3515FITC320 nM0.75∼100倍1 mg20600Cal-520® -Dextran Conjugate *MW 10,000*493515FITC320 nM0.75∼100 fold5 mg20601Cal-520L®-Dextran Conjugate*MW 10,000*493515FITC 0.75∼100 倍 1 mg20602Cal-520®-生物素偶联物493515FITC320 nM0.75∼100 倍5x50 µg20605Cal-520®-生物胞素偶联物493515FITC320 nM0.75∼100 倍5x 50 µg20606Cal-520® NHS Ester493515FITC320 nM0.75∼100 fold100 µg20609Cal-520 ® maleimide493515FITC320 nM0.75∼100 fold100 µg20610Cal-520L™ maleimide493515FITC 0.75∼100 fold100 ug20611Cal-590™ AM574588Cy3/TRITC561 nM0.62∼100 fold10x50 µg20511 Cal-590™ AM574588Cy3/TRITC561 nM0.62∼100 fold1 mg20512Cal-590™ 钾盐574588Cy3/ TRITC561 nM0.62∼100 倍1 mg20519Cal-590™ 钠盐574588Cy3/TRITC561 nM0.62∼100 倍5x50 µg20515Cal-590™-Dextran Conjugate *MW 3,000*574588Cy3/TRITC561 nM0.62∼100 倍1 mg20508Cal-590™-葡聚糖偶联物 *MW 10,000*574588Cy3/TRITC561 nM0.62∼100 fold1 mg20509Cal-590L® Dextran Conjugate *MW 10,000*569590Cy3/TRITC∼230 uM ∼100 fold1 mg20525Cal-630™ AM609626Texas Red792 nM0 .37∼100 倍 10x50 µg20531Cal-630™ AM609626Texas Red792 nM0。 37∼100 倍 1 mg20532Cal-630™, 钠盐609626Texas Red792 nM0.37∼100 倍5x50 µg20535Cal-630™-葡聚糖偶联物 *MW 10,000*609626Texas Red792 nM0.37∼100倍1 mg20546Cal-670™-葡聚糖偶联物*MW 3,000*667680Cy5853 nMN/D∼100倍1 mg2045 6Cal-670™-葡聚糖偶联物 *MW 10,000*667680Cy5853 nMN/D∼100倍1 mg20457Cal-770™-葡聚糖偶联物*MW 3,000*758783Cy7853 nMN/D∼100倍1 mg20461Cal-770™-葡聚糖偶联物*MW 10,000*758783Cy7853 nMN/D∼100倍1 mg2 0462整表DyeEx (nm)Em (nm )Filter SetKd¹Φ²FCa/FFree³Unit SizeCat No.Items per page: 510All1 - 10 of 42⟨⟩Kd = Calcium dissociation constant.Φ = 在 5 mM 柠檬酸钙存在下的荧光量子产率。FCa/FFree = 钙结合的荧光强度增加相对于其无钙指示剂形式的指示剂。N/D = 未确定。

Fluo 8® 钙指示剂卡巴胆碱剂量反应m在 HEK-293 细胞中测定。 Hek-293 细胞以 40,000 个细胞/100 µL/孔的密度接种在 Costar 黑壁/透明底部 96 孔板中过夜。在室温下，使用 Fluo-8® AM（货号 21083）或 Fluo-4 AM（货号 20550）将细胞与 100 µL 染料加载溶液一起孵育 1 小时。 NOVOstar (BMG Labtech) 添加卡巴胆碱（50 µL/孔）以达到最终指示浓度。 Fluo-8® AM 解决了荧光染料常见的主要限制之一，即细胞加载所需的苛刻条件。传统荧光染料，如 Fluo-2 AM（货号 20495）、Fluo-3 AM（货号 21013 和 Fluo-4 AM（货号 20550））需要加载并与细胞一起在 37°C 下孵育在读取读数前长达一个小时。这不仅会使细胞承受严酷的温度，而且还需要用户花时间加热和冷却细胞培养物。此外，它还引入了孵育温度作为可能的混杂变量。Fluo-8® AM解决了所有这些问题lem 通过提供可以在室温下加载到细胞中的强大的钙指示剂。与其他荧光染料相比，Fluo-8® AM 对温度的依赖性更小，可以在更广泛的实验条件下获得更一致的结果。此外，Fluo-8® AM 的孵育时间仅为 20 分钟，可实现快速周转以提高生产率。最好的部分是，即使进行结构修改和改进，Fluo-8® AM 的光谱特性仍保持不变，保持熟悉的 Fluo-4 AM 光谱（即 Ex/Em = 494/517nm）。 Fluo 8® 钙指示剂的主要特点更快的细胞加载：Fluo 8® 可以在室温下轻松加载到细胞中。 Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM 需要 37°C 的加载温度更亮的荧光：Fluo 8® 比 Fluo-4 AM 亮 2 倍，比 Fluo-3 AM 亮 4 倍方便：Fluo 8® 与Fluo-4 和 Fluo-3 使升级变得容易 了解更多 表 8. Fluo-8® green f用于活细胞钙成像的荧光钙指示剂。指示剂▲▼Ex (nm)▲▼Em (nm)▲▼Kd¹▲▼Φ²▲▼FCa/FFree³▲▼Unit Size▲▼Cat No.▲▼Fluo-8®, AM495516389 nM0.16∼200 fold1 mg21080Fluo-8®, AM495516389 nM0.16∼200 fold10x50 µg21082Fluo-8®, AM495516389 nM0.16∼200 fold20x50 µg21083Fluo-8®, AM495516389 nM0.16∼ 200 倍 5x50 µg21081Fluo-8H™，AM495516232 nM0。 16∼200 倍10x50 µg21091Fluo-8H™, AM495516232 nM0.16∼200 倍1 mg21090Fluo-8L™, AM4955161.9 µM0.16∼200 倍1 mg21096Fluo-8L™, AM4955161.9 µM0.16∼200 倍1 0x50 µg21097Fluo-8FF™, AM49551610 µM0.16∼200 倍10x50 µg21104Fluo-8FF™, AM49551610 µM0.16∼200 倍1 mg21105Fluo-8®, 钾盐495516389 nM0.16∼200 倍1 mg21087Fluo-8®, 钾盐495516389 nM0.16∼200 fold10x50 µg21089Fluo-8®, 钠salt495516389 nM0.16∼200 fold1 mg21086Fluo-8®, sodium salt495516389 nM0.16∼200 fold10x50 µg21088Fluo-8H™, sodium salt495516232 nM0.16∼200 fold10x50 µg21095Fluo-8L™, 钠盐4 955161.9 µM0.16∼200 fold10x50 µg21098Fluo- 8L™, 钠盐4955161.9 µM0.16∼200 fold1 mg21099整表指标Ex (nm)Em (nm)Kd¹Φ²FCa/FFree³Unit SizeCat No.Items per page: 510All1 - 10 of 17⟨⟩Kd = Calcium dissociation constant.Φ = fluorescence quantum yield in the presence of 5 mM calcium citrate.FCa/FFree = 钙结合指示剂相对于其无钙指示剂形式的荧光强度增加。

Fluo-3 和 Fluo-4 钙指示剂Fluo-3 是一种钙指示剂，于 1989 年首次推出，用于流式细胞术和共聚焦激光扫描显微镜。 Fluo-3 是一种类似荧光素的化合物，在没有游离 Ca2+ 的情况下实际上是非荧光的。然而，在与钙结合后，Fluo-3 在 525 nm 处的发射强度急剧增加。作为指示剂，Fluo-3 在细胞信号通路、肌细胞和神经递质激活的研究中一直是必不可少的。 Fluo-4 建立在 Fluo-3 的核心结构之上，但对其进行了修改以增加荧光信号强度。化学结构的改变导致蓝色-sFluo-4 的激发最大值从 506nm（Fluo-3）转移到 494nm。实际上，这个 12 nm 的偏移使 Fluo-4 的激发最大值更接近标准氩激光器的波长（即 488nm）。这导致更好的激发，因此荧光信号明显更亮并且对钙浓度的变化更敏感。荧光 3，AMFluo 4, AMFluo 8, AMU2OS 细胞以 40,000 个细胞/100 µL/孔接种过夜a 96-well black wall/clear bottom costar plate. 除去生长培养基，将细胞分离e 与 100 µL Fluo-3 AM、Fluo-4 AM 和 Fluo-8® AM 在 HHBS 中以 4 µM 的浓度在 37°C、5% CO2 培养箱中孵育 1 小时。用 200 µL HHBS 洗涤细胞两次，然后使用 FITC 通道用荧光显微镜 (Olympus IX71) 成像。表 9. 用于活细胞钙成像的 Fluo-3、Fluo-4 和 Fluo-5 绿色荧光钙指示剂。指示剂▲▼Ex (nm)▲▼Em (nm)▲▼滤光片组▲▼Kd¹▲▼Φ²▲▼FCa /FFree³▲▼单位尺寸▲▼货号▲▼Fluo-3, AM *超纯级* *CAS 121714-22-5*507516FITC390 nM0.15∼100 fold1 mg21011Fluo-3, AM *散装* *CAS 121714- 22-5*507516FITC390 nM0.15∼100 fold50 mg21012Fluo-3, AM *CAS 121714-22-5*507516FITC390 nM0.15∼100 fold1 mg21010Fluo-3, AM *超纯级* *CAS 121714-22-5*507 516FITC390纳米.15∼100倍1 mg21013Fluo-3，五钾盐507516FITC390 nM0.15∼100倍1 mg21017Fluo-3，五铵盐507516FITC390 nM0.15∼100倍1 mg21018Fluo-3，五钠盐507516FITC390 nM 0.15∼100倍1 mg21016Fluo-3FF, 五钾盐507516FITC100 µM0.15∼100倍1 mg21019Fluo-4 AM *超纯级* * CAS 273221-67-3*495528FITC345 nM0.16∼100倍1 mg20550Fluo-4 AM *超纯级* *CAS 273221-67-3*495528FITC345 nM0.16∼1 00 fold10x50 µg20551Fluo-4 AM *超纯级* *CAS 273221-67-3*495528FITC345 nM0.16∼100 fold5x50 µg20552Fluo-4, 五钾盐495528FITC345 nM0.16∼100 fold1 mg20555Fluo-4 , 五钾盐495528FITC345 nM0.16∼100倍1 mg20556Fluo- 5F, AM494516FITC2.3 µM0.16∼100 fold10x50 µg20560Fluo-5N, AM494516FITC90 µM0.16∼100 fold10x50 µg20566Fluo-5F, 五钾盐494516FITC2.3 µM0.16∼100 fold500 µg20 562Fluo-5N, pentapotassium salt494516FITC90 µM0.16∼100 fold500 µg20567整表IndicatorEx (nm)Em (nm)Filter SetKd¹Φ²FCa/FFree³Unit SizeCat No.Items per page: 510All1 - 10 of 17⟨⟩Kd = Calcium dissociation constant.Φ = 在 5 mM 柠檬酸钙存在下的荧光量子产率。FCa/FFree = 增加钙结合指示剂相对于其游离钙指示剂形式的荧光强度。

钙 A用于筛选 GPCR 和钙通道目标的 ssays使用 Screen Quest™ Calbryte™ 520 Calcium Assay Kit、FLIPR® Calcium 4 Assay (Molecular Devices) 和 Fluo-4 比较 CHO-K1 细胞中内源性 P2Y 受体对 ATP 的荧光信号响应Direct™ 钙测定（Molecular Probes®）。将 CHO-K1 细胞以 50,000 个细胞/100 µL/孔的密度接种到 96 孔黑壁/透明底部 Costar 板中过夜。分别用所有三种测定法测量钙通量响应。 FlexStation 3 添加 ATP（50 µL/孔）以达到最终指示浓度。 Screen Quest™ 钙通量测定是 cell-ba 中的首选方法sed 高通量筛选 (HTS) 以确定激动剂刺激和拮抗剂抑制的信号通过 G 蛋白偶联受体 (GPCR)。迄今为止，市场上大约三分之一的药物都是针对 GPCR 设计的。 Screen Quest™ Calcium Assay 提供了一种方便的免洗、均相荧光检测，用于监测 GPCR 和钙通道，并检测广泛生物靶标的细胞内钙动员。该测定可以在方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板格式中进行，并且可以轻松地适应自动化。 Screen Quest™ 钙测定针对以下仪器进行了优化和验证：FDSS®、FLIPR®、ViewLux™、NOVOStar、ArrayScan™、FlexStation® 和 IN Cell Analyzer。 Screen Quest™ Calcium AssaysOptimized protocols validated for a broad range of microplate readersSuperior signal intensity (high S/B ratios) and well-to-well uniformityLarge assay window for assaying chall 的主要特点enging cell lines and receptorsHigh performance calcium flux assays for 1536 well plates Table 10. Screen Quest™ Calcium Assays for screening GPCR and calcium channel targets.钙测定▲▼Ex (nm)▲▼Em (nm)▲▼Cutoff (nm) ▲▼单位尺寸▲▼目录号▲▼Screen Quest™ Fluo-4 免洗钙测定试剂盒49052551510 板36325Screen Quest™ Fluo-4 免洗钙测定试剂盒490525515100 板36326Screen Quest™ Fluo-8 免洗钙测定试剂盒4905255101 板36314Screen Qu est™ Fluo-8免洗钙测定试剂盒49052551010 板36315Screen Quest™ Fluo-8 免洗钙测定试剂盒490525510100 板36316Screen Quest™ Fluo-8 免洗钙测定试剂盒490525510100 板36316Screen Quest™ Fluo-8 培养基去除钙测定试剂盒*针对 Di 优化困难细胞系*4905255101 板36307Screen Quest™ Fluo -8 培养基去除钙测定试剂盒*针对困难细胞系进行了优化*49052551010 板36308Screen Quest™ Fluo-8 培养基去除钙测定试剂盒*针对困难细胞系进行了优化*490525510100 板36309Screen Quest™ Calbryte-520 无丙磺舒免洗钙测定试剂盒4905255151 板36317Screen Quest™ Calbryte-520 无丙磺舒免洗钙测定试剂盒49052551510 板36318Screen Quest™ Calbryte-520 无丙磺舒免洗钙测定试剂盒4 90525515100 plates36319屏幕任务™ Fura-2 免洗钙测定试剂盒340、38051047010 板36320Screen Quest™ Fura-2 免洗钙测定试剂盒340、380510470100 板36321Screen Quest™ Rhod-4 免洗钙测定试剂盒5405905701 板36333Screen Quest™ Rhod-4 否洗涤钙测定试剂盒54059057010 板36334Screen Quest™ Rhod -4 免洗钙测定试剂盒540590570100 板36335Screen Quest™ Rhod-4 免洗钙测定试剂盒*去除培养基*5405905701 板36330Screen Quest™ Rhod-4 免洗钙测定试剂盒*去除培养基*54059057010 板36331Screen Quest™ Rhod-4 否洗涤钙测定试剂盒*培养基去除*540590570100 板36332Screen Quest™ Calbryte-590 无丙磺舒和免洗钙测定试剂盒5405905701 板36200Screen Quest™ Calbryte-590 无丙磺舒免洗钙测定试剂盒54059057010 板36201Screen Quest™ Calbryte-590 无丙磺舒免洗钙测定试剂盒540590570100 板36202整表钙测定Ex (nm)Em (nm)Cutoff (nm)Unit尺寸目录号每页项目数：510All1 - 10 of 23⟨⟩

用于药物发现和高通量筛选的 GPCR 细胞系Screen Quest™ 细胞系是一系列已成功用于药物发现和筛选环境的细胞，用于研究G 蛋白偶联受体 (GPCR) 通常不通过细胞内钙偶联。它已与 FLIPR、FDSS 系统以及许多受体的非 Gq 偶联成员一起有效使用，例如趋化因子、5-羟色胺、谷氨酸、多巴胺、阿片类药物、加压素和 α- 和 ß- 肾上腺素能受体家族。超过 60% 的已知 GPCR 信号通过 Gq 以外的途径发出，导致细胞内钙增加，并且随着基因组学揭示更多的 G 蛋白偶联d 受体靶点这一趋势还在继续增加。 Screen Quest™ 细胞系用于研究通常不通过细胞内钙偶联的 GPCR。 Screen Quest™ 细胞系基于一系列 G 蛋白嵌合体，包括混杂的 G 蛋白 Gα16。嵌合体由 Gq 蛋白复合物的 α 亚基组成，其 5 个羧基末端氨基酸已被其他 G 蛋白（Gαs、Gαi、Gαo 或 Gαz）中的一种氨基酸取代。这些氨基酸负责受体与其 G 蛋白的偶联。这些嵌合体与通常通过 cAMP 途径起作用的特定非 Gq 偶联受体的共表达可能会导致在受体刺激时产生细胞内钙信号。表 11. 用于药物发现和高通量筛选分析的稳定 GPCR 细胞系。产品名称▲▼单位尺寸▲▼货号▲▼Screen Quest™ HEK-CNGC-Amylin 3 Receptor CellsEach38000Screen Quest™ HEK-CNGC-Cannabinoid Receptor1 CellsEach38001Screen Quest™ CHO-Ga16-趋化因子 (C-C) 受体 2B CellsEach38002Screen Quest™ HEK-CNGC-趋化因子（C-X-C 基序）受体 4 CellsEach38003Screen Quest™ CHO-Ga16 嵌合体细胞系Each38105Screen Quest™ CHO-G qi Chimera 细胞系Each38101Screen Quest™ CHO-Gqo Chimera 细胞系Each38102Screen Quest™ CHO-Gqs Chimera 细胞系Each38104Screen Quest™ CHO-Gqz Chimera 细胞系Each38103Screen Quest™ HEK-CNGC-多巴胺受体1 (DRD1) CellsEach38004Screen Quest™ HEK-CNGC-胰高血糖素样受体1 (GLP1R) CellsEach38005Screen Quest™ 人类伤害感受素受体 Ga16 偶联 CHO 细胞 (NOP-Ga16)Each38100Screen Quest™ Live Cell cAMP Assay Service PackEach36382Screen Quest™ HEK-CNGC-Opiate Receptor-like 1 (ORL1) CellsEach38006整表产品名称单位尺寸目录号每页项目数：510All1 - 10 of 14⟨ ⟩

订购信息表 12.Cell Meter™ 钙测定试剂盒和其他钙指示剂产品名称▲▼Ex (nm)▲▼Em (nm)▲▼单位尺寸▲▼目录号▲▼Cell Meter™流式细胞仪钙测定y Kit493515100 Tests36310Cell Meter™ 免洗和无丙磺舒的端点钙测定试剂盒 *针对酶标仪进行了优化*495525100 Tests36312OG488 BAPTA-1，六钾盐 [相当于 Oregon Green® 488 BAPTA-1，六钾盐] *细胞不渗透*49352250 0 微克 20506OG488 BAPTA -1, AM [相当于 Oregon Green® 488 BAPTA-1, AM] *细胞渗透性*49352210x50 µg20507 表 13. 细胞渗透性钙螯合剂产品名称▲▼单位规格▲▼货号▲▼EDTA, AM ester10x50 µg19010BAPTA, AM *CAS 126150-97-8*25 mg21001BAPTA, AM *超纯级* *CAS 126150-97-8*25 mg21002EGTA AM *CAS 99590-86-0*10 mg21005EGTA AM *10 mM DMSO 溶液*1 mL21006Quin-2, AM *CAS 83104-85-2*1 mg21050Quin-2，四钾盐 *CAS 149022-19-5*5 mg21052 表 14. 细胞不可渗透的钙螯合剂产品名称▲▼单位尺寸▲▼货号▲▼BAPTA，四钾盐* CAS 73630-08-7*100 mg21003BAPTA 四钠盐 *CAS 126824-24-6*100 mg21004EGTA 四钠盐 *CAS 13368-13-3*1 g21007EGTA 四钠盐 *10 mM 水溶液溶液*10 mL21008